高效液相色譜法（HPLC）因其選擇性高、靈敏度高、分析速度快，已成為現(xiàn)代分離測(cè)試的重要手段。色譜柱作為高效液相分離系統(tǒng)中的重要環(huán)節(jié)，色譜柱的類(lèi)型決定色譜系統(tǒng)的性質(zhì)，色譜柱的粒徑和長(zhǎng)度影響分析時(shí)間和分析效率。
在液相色譜分析中，使用較多的分離模式是正相色譜分離模式和反相色譜分離模式，正相色譜和反相色譜怎么區(qū)分，適用范圍是哪些，今天小編就和大家聊一聊。
正相色譜（NPC）是采用極性固定相（如帶有二醇基、氨基、和氰基的固定相及硅膠等），流動(dòng)相通常使用比鍵合相極性小的非極性或弱極性有機(jī)溶劑，如烴類(lèi)溶劑，或其中加入一定量的極性溶劑（如氯仿、醇、四氫呋喃、乙腈等），以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度。是一種根據(jù)目標(biāo)物的極性差異將其分開(kāi)的液相色譜技術(shù)。
劃重點(diǎn)：正相色譜=固定相極性>流動(dòng)相極性
一般認(rèn)為正相色譜的分離機(jī)制屬于分配色譜。
● 在正相色譜中，樣品分子與載體基質(zhì)的硅醇基團(tuán)發(fā)生特異的極性相互作用，與固定相產(chǎn)生強(qiáng)極性相互作用的極性樣品分子比較難被洗脫，在柱內(nèi)停留比較長(zhǎng)的時(shí)間。
● 反之，極性較弱或非極性分子與硅膠之間產(chǎn)生相對(duì)較弱的相互作用，比較容易被洗脫，因而在柱內(nèi)停留的時(shí)間較短。組分的分配比K值，隨其極性的增加而增大，但隨流動(dòng)相中極性溶劑的極性增大（或濃度增大）而降低。
● 同時(shí)，固定相的極性越大，組分的保留值越大。
因此，正相色譜可以根據(jù)目標(biāo)物的極性差別而達(dá)到分離目的。
在正相色譜分離中，可通過(guò)薄層色譜法（TLC）選擇合適的流動(dòng)相。
正相色譜常用的四種固定相，極性大小順序是：
硅膠>氨基>二醇基>氰基
正相色譜的適用范圍：
1）適合用于分離異構(gòu)體；
2）適用于絕不溶于水的化合物；
3）適用于分離在反相色譜中不保留或極性較強(qiáng)的化合物，比如生物堿、核苷酸類(lèi)、有機(jī)酸等。
反相色譜（RPC）是指利用非極性的反相介質(zhì)為固定相，極性有機(jī)溶劑、水溶液為流動(dòng)相，根據(jù)溶質(zhì)極性(疏水性)的差別進(jìn)行溶質(zhì)分離與純化的洗脫色譜法。
● 反相色譜的固定相大多是在硅膠表面鍵合疏水基團(tuán)，基于樣品中的不同組分和疏水基團(tuán)之間疏水作用的不同而分離。
● 在生物大分子分離中，多采用離子強(qiáng)度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。
● 樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分最先被沖洗出，而極性弱的組分會(huì)在色譜柱保留更強(qiáng)，后出峰。
劃重點(diǎn)：反相色譜=固定相極性<流動(dòng)相極性
反相色譜常用的固定相種類(lèi)有：
C18、C8、C4、C3、C1、苯基、C30、PFP等。
反相色譜主要應(yīng)用于相對(duì)分子質(zhì)量低于5000，特別是1000以下的弱極性和非極性小分子物質(zhì)的分析和純化，如蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、核酸、甾類(lèi)、脂類(lèi)、脂肪酸、糖類(lèi)、植物堿等含有非極性基團(tuán)的各種物質(zhì)。
